5'端加帽
帽子结构的功能
5'端帽子结构(Cap)对mRNA至关重要,具有以下功能:
- 保护mRNA免受5'外切酶降解
- 促进翻译起始因子eIF4E结合
- 协助mRNA从细胞核输出
- 参与mRNA剪接和降解调控
帽子类型
常见的帽子结构包括:
- Cap 0:最简单的帽子结构
- Cap 1:在Cap 0基础上增加2'-O-甲基化
- Cap 2:进一步甲基化
加帽方法
转录后加帽
转录完成后使用加帽酶添加帽子,需要额外步骤,效率较低。
共转录加帽
在转录反应中加入帽子类似物,转录同时完成加帽。效率高,是目前主流方法。常用帽子类似物包括ARCA、CleanCap等。
3'端加尾
Poly(A)尾的功能
- 增强mRNA稳定性
- 促进翻译效率
- 参与mRNA核质运输
加尾方法
酶法加尾
使用Poly(A)聚合酶在转录后添加Poly(A)尾,长度可控。
模板编码
在DNA模板中编码Poly(A)序列,转录时直接合成。更常用,可确保一致的尾长度。
质量控制
加帽率和Poly(A)尾长度是mRNA产品质量的关键指标,需要通过适当方法检测和控制。