5'端加帽

帽子结构的功能

5'端帽子结构(Cap)对mRNA至关重要,具有以下功能:

  • 保护mRNA免受5'外切酶降解
  • 促进翻译起始因子eIF4E结合
  • 协助mRNA从细胞核输出
  • 参与mRNA剪接和降解调控

帽子类型

常见的帽子结构包括:

  • Cap 0:最简单的帽子结构
  • Cap 1:在Cap 0基础上增加2'-O-甲基化
  • Cap 2:进一步甲基化

加帽方法

转录后加帽

转录完成后使用加帽酶添加帽子,需要额外步骤,效率较低。

共转录加帽

在转录反应中加入帽子类似物,转录同时完成加帽。效率高,是目前主流方法。常用帽子类似物包括ARCA、CleanCap等。

3'端加尾

Poly(A)尾的功能

  • 增强mRNA稳定性
  • 促进翻译效率
  • 参与mRNA核质运输

加尾方法

酶法加尾

使用Poly(A)聚合酶在转录后添加Poly(A)尾,长度可控。

模板编码

在DNA模板中编码Poly(A)序列,转录时直接合成。更常用,可确保一致的尾长度。

质量控制

加帽率和Poly(A)尾长度是mRNA产品质量的关键指标,需要通过适当方法检测和控制。